Ny metod för virulensbestämning av fotrötebakterier hos får

Virulent footrot causes extensive damage to the feet of affected sheep and leads both to animal suffering and economic losses. In the UK, footrot is estimated to cost the industry £24 million annually. In the current situation there is no method for virulence determination of the footrot pathogen Dichelobacter nodosus available in Sweden. Outbreak of virulent footrot risk becoming more common in Swedish sheep in the future because of EU rules on free trade with animals, climate change and reduced funding to the footrot control program. The goal of this project is to develop a test that quickly and cost-effectively can identify potential sheep flocks carrying virulent strains of D. nodosus and can be used as a diagnostic tool in the ongoing control program against footrot. The test would be especially valuable in the control program to ensure that virulent footrot is not present in sheep flocks where the clinic is uncertain.

Virulent fotröta ger upphov till mycket omfattande skador på klövarna hos drabbade får och orsakar både djurlidande och stora ekonomiska förluster. I Storbritannien beräknas fotröta ge ett ekonomiskt bortfall på 24 miljoner pund årligen. I dagsläget finns ingen metod för virulensbestämning av fotrötebakterien Dichelobacter nodosus tillgänglig i Sverige. Utbrott av virulent fotröta riskerar att bli vanligare hos svenska får i framtiden på grund av EU-regler för frihandel med djur, klimatförändringar och minskade anslag till kontrollprogrammet. Målet med detta projekt är att ta fram ett test som snabbt och kostnadseffektivt kan identifiera eventuella fårbesättningar som bär på virulenta stammar av D. nodosus och som kan användas som ett diagnostiskt redskap i det pågående kontrollprogrammet mot fotröta. Testet skulle bli speciellt värdefullt i kontrollprogrammet för att säkerställa att det inte rör sig om virulent fotröta i besättningar där kliniken är osäker.

Fotröta är en smittsam klövsjukdom hos får som orsakas av bakterien D. nodosus. Sjukdomen kan uppträda med varierande svårighetsgrad som till stor del beror på virulensegenskaper hos den infekterande bakteriestammen. En metod för virulensbestämning av D. nodosus har inte tidigare funnits tillgänglig i Sverige. Syftet med projektet var att utveckla ett test som kan identifiera eventuella besättningar som bär på virulenta stammar av D. nodosus och som kan användas som ett diagnostiskt redskap i det pågående kontrollprogrammet mot fotröta. En real-tids PCR baserad på en känd virulensgen hos D. nodosus utvecklades som var känslig, specifik och gick snabbt att utföra. Metoden krävde dessutom inte att bakterien odlades fram innan analys. Ett annat mål var att utvärdera om flera prover kunde analyseras tillsammans på en och samma gång dvs. poolas för att minska framtida analyskostnader. Denna studie visade att prover kunde poolas fem och fem innan analys med bibehållen känslighet.

Bakgrund och syfte
Fotröta är en smittsam klövsjukdom hos får som orsakas av bakterien Dichelobacter nodosus. Sjukdomen förekommer i de flesta lammproducerande länder och ger upphov till både djurlidande och ekonomiska förluster. Fotröta kan uppträda med varierande svårighetsgrad som till stor del beror på virulensegenskaper hos den infekterande bakteriestammen. En snabb och säker metod för virulensbestämning av D. nodosus har inte tidigare funnits tillgänglig i Sverige. Målet med projektet var att ta fram ett test som snabbt och kostnadseffektivt kan identifiera eventuella besättningar som bär på virulenta stammar av D. nodosus och som kan användas som ett diagnostiskt redskap i det pågående kontrollprogrammet mot fotröta (Klövkontrollen).

Resultat
Ett test för virulensbestämning av D. nodosus som kunde påvisa samt skilja mellan benigna (godartade) respektive virulenta (aggressiva) stammar utvecklades i detta projekt. Testet krävde inte att bakterien odlades fram innan analys utan kunde användas direkt på kliniska prover såsom svabbar och biopsier. Det framtagna testet hade hög specificitet, känslighet och gick snabbt att utföra. Det var även möjligt att analysera prover från fem olika djur tillsammans på en och samma gång (poolning) med fortsatt god känslighet. Testet hade god känslighet vid jämförelse med ett liknande test och gick något snabbare att utföra.

Metod
Ett test för virulensbestämning av D. nodosus i form av en real-tids PCR (Polymerase Chain Reaction) designades med hjälp av en mjukvara avsedd för ändamålet (Primer Express). För att utvärdera det framtagna testet användes både referensstammar från olika bakteriearter inklusive D. nodosus såväl som kliniska prover. För att undersöka om flera prover kunde analyseras tillsammans på en och samma gång dvs. poolas togs 250 nya prover från 19 fårbesättningar som dels analyserades individuellt och dels poolades fem och fem. Det ny framtagna testet jämfördes även med ett liknande test som publicerats under projektets gång med avseende på bland annat känslighet och snabbhet.